(Flow cytometry , FCM ) er frumugreiningartæki sem mælir flúrljómunarstyrk litaðra frumumerkja. Um er að ræða hátæknitækni sem byggir á greiningu og flokkun stakra frumna. Það getur fljótt mælt og flokkað stærð, innri byggingu, DNA, RNA, prótein, mótefnavaka og aðra eðlisfræðilega eða efnafræðilega eiginleika frumna og getur byggt á söfnun þessara flokka.
Flæðifrumumælir samanstendur aðallega af eftirfarandi fimm hlutum:
1 Flæðishólf og vökvakerfi
2 Laser ljósgjafi og geislamótunarkerfi
3 Ljóskerfi
4 Raftæki, geymslu-, skjá- og greiningarkerfi
5 frumuflokkunarkerfi
Meðal þeirra er leysirörvun í leysiljósgjafanum og geislamyndunarkerfinu aðalmælingin á flúrljómunarmerkjum í frumuflæðismælingum. Styrkur örvunarljóssins og lýsingartími eru tengdir styrk flúrljómunarmerkisins. Laser er samhangandi ljósgjafi sem getur veitt einni bylgjulengd, hástyrka og mikla stöðugleika lýsingu. Það er kjörinn örvunarljósgjafi til að uppfylla þessar kröfur.
Það eru tvær sívalur linsur á milli leysigjafans og flæðishólfsins. Þessar linsur fókusa leysigeisla með hringlaga þversnið sem sendir frá leysigjafanum yfir í sporöskjulaga geisla með minna þversnið (22 μm × 66 μm). Geislaorkan innan þessa sporöskjulaga geisla er dreift í samræmi við eðlilega dreifingu, sem tryggir stöðuga birtustyrk fyrir frumur sem fara í gegnum leysiskynjunarsvæðið. Á hinn bóginn samanstendur sjónkerfið af mörgum settum af linsum, pinholes og síum, sem gróflega má skipta í tvo hópa: andstreymis og niðurstreymis flæðishólfsins.
Sjónkerfið fyrir framan flæðishólfið samanstendur af linsu og pinhole. Meginhlutverk linsunnar og pinhole (venjulega tvær linsur og pinhole) er að fókusa leysigeislann með hringlaga þversniði sem leysigjafinn gefur frá sér í sporöskjulaga geisla með minni þversnið. Þetta dreifir leysiorkunni í samræmi við eðlilega dreifingu, sem tryggir stöðuga birtustyrk fyrir frumur yfir leysiskynjarasvæðið og lágmarkar truflun frá villuljósi.
Það eru þrjár megingerðir af síum:
1: Long pass filter (LPF) - leyfir aðeins ljósi með bylgjulengd hærri en ákveðið gildi að fara í gegnum.
2: Short-pass filter (SPF) - leyfir aðeins ljósi með bylgjulengd undir ákveðnu gildi að fara í gegnum.
3: Bandpass filter (BPF) - leyfir aðeins ljósi á ákveðnu bylgjulengdarsviði að fara í gegnum.
Mismunandi samsetningar sía geta beint flúrljómunarmerkjum á mismunandi bylgjulengdum að einstökum ljósmargfaldarrörum (PMT). Til dæmis eru síur til að greina græna flúrljómun (FITC) fyrir framan PMT LPF550 og BPF525. Síurnar sem notaðar eru til að greina appelsínurauða flúrljómun (PE) fyrir framan PMT eru LPF600 og BPF575. Síurnar til að greina rauða flúrljómun (CY5) fyrir framan PMT eru LPF650 og BPF675.
Flæðifrumumæling er aðallega notuð til frumuflokkunar. Með framförum tölvutækni, þróun ónæmisfræði og uppfinningu einstofna mótefnatækni, eru notkun þess í líffræði, læknisfræði, lyfjafræði og öðrum sviðum sífellt útbreiddari. Þessar umsóknir fela í sér greiningu á frumuvirkni, frumudreifingu, frumugerð, æxlisgreiningu, greining á lyfjavirkni osfrv.
Birtingartími: 21. september 2023
